Doppelt stabil und
genetisch reinerbig

Die Züchterinnen und Züchter legen fest, von welchen Abstammungen Doppelhaploiden-Linien entwickelt werden sollen.

Das Team züchtet die Spenderpflanzen im Gewächshaus. Die Pflanzen müssen unter speziellen Bedingungen herangezogen werden, das Ausgangsmaterial ist sehr wichtig.

Sobald die Knospen die richtige Größe von ca. 3 mm haben, werden sie vorsichtig geerntet. Es besteht nur ein schmales Zeitfenster für die Entnahme des für die Doppelhaploiden-Methode geeigneten Blütenknospenmaterials. Es werden ca. 120–160 Knospen benötigt.

Um Mikroorganismen abzutöten, werden die Knospen mit einer Oberflächendesinfektion gereinigt. Danach werden sie mit Nährlösung in einen sterilen Behälter überführt.

Der Behälter mit Knospen und Nährlösung kommt in einen Homogenisator, der die Mikrosporen, die das Erbgut enthalten, weiter aus dem Blütengewebe trennt. Durch ein Sieb wird das Blütengewebe entfernt.

Die Mikrosporen verbleiben in der Lösung und werden durch Zentrifugation aufgereinigt. So erhält man eine hochkonzentrierte Lösung an Mikrosporen, die sich am Boden des Röhrchens als Pellet absetzen.

Die Lösung wird abgegossen. Auf das verbleibende Pellet kommt nun eine Nährlösung mit Wachstumsregulatoren, die die Zellen zur Teilung anregen.

Das Röhrchen wird für zwei Tage auf einen Schüttler gegeben und anschließend zentrifugiert. Am Boden bildet sich wieder ein Pellet aus den Mikrosporen.

Das Mikrosporen-Pellet wird, mit Nährlösung vermischt, in eine Petrischale gegeben und für 5–7 Tage dunkel im Kulturraum gelagert. Dann kommt die Lösung auf einen Schüttler, der durch die kontinuierliche Bewegung die Zellteilung weiter anregt. Es bilden sich Embryonen.

Sobald die Embryonen eine Größe von 2–3 mm erreicht haben, werden sie auf ein Festmedium gesetzt. In einer Zellkulturkammer (je nach Kulturart spezifiziert, was Licht und Temperatur angeht) wachsen die Embryonen zu Pflänzchen heran.

In einer Ploidie-Messung im Durchflusszytometer wird im Labor geprüft, ob die Verdopplung erfolgreich war, damit Züchterinnen und Züchter doppelhaploide Pflanzen bekommen.

Mittels Markeranalyse werden die Eigenschaften noch einmal überprüft und nur die besten Doppelhaploiden-Pflanzen für die weitere Sortenenentwicklung ausgewählt. Mit molekularen Markern lassen sich diese Eigenschaften (Gene) schnell und einfach nachweisen, bevor sie in der ausgewachsenen Pflanze in Erscheinung treten.

Die Züchterinnen und Züchter erhalten die ausgewählten Pflanzen für die Weiterzüchtung.